Modele fbf

Modèle #normanreedus visage de bébé à nouveau:-) pic.twitter.com/Ib8gol9TVZ pour les interactions protéine – mRNA, des expériences d`immunopréprécipitation ont été effectuées comme décrit (Suh et al. 2006) avec des modifications mineures: les mutants FBF-2 (q738) ont été suspendus dans du PBS contenant un cocktail inhibiteur de protéase sans EDTA (Roche). Les vers ont été homogénéisés à l`aide d`un mortier et d`un pilon, puis d`un homogénéisateur de dounce. Des Immunopprécipités ont été effectuées avec un antisérum de lapin α-FBF-1 ou un sérum préimmunisé, lié à des billes de protéine A (Pierce). Le lapin anti-FBF-1 (animal no. 695) a été produit par l`injection de lapins avec de la protéine FBF-1 purifiée de glutathion-S-transférase (GST) (contenant des acides aminés 121 – 614). Les anticorps anti-FBF-1 reconnaissent principalement le FBF-1 sur les taches occidentaux de FBF-1 et FBF-2 traduits in vitro. (Yup, c`est lui avec la chemise bleue et des tonnes d`eyeliner.) Norman Reedus pour GAP, 90. pic.twitter.com/QOeDt3cfdk pour savoir si le GLD-3 est un pont essentiel pour l`interaction FBF – GLD-2, nous avons utilisé des anticorps α-FBF-1 pour immunopprécipité des protéines d`un mutant nul de GLD-3. À notre grande surprise, GLD-2 est descendu à peu près la même quantité de GLD-3 (+) et GLD-3 (0) extraits (figure 6F, voie 6). Par conséquent, le GLD-3 n`est pas essentiel pour l`Association FBF – GLD-2. L`une des explications est que l`interaction FBF – GLD-2 est suffisante pour l`interaction physique, même si elle peut être renforcée par le GLD-3 ou d`autres facteurs (p. ex., modifications posttranslationnelles, autres protéines de transition).

Pour tester la possibilité que l`ARN puisse médier la liaison entre GLD-2 et FBF-1, nous avons traité des extraits de ver avec la RNase A avant l`immunopréprécipitation avec l`anticorps α-FBF-1. Bien que la plupart des ARN aient été dégradés (données non affichées), l`interaction FBF – GLD-2 était encore observée (figure 6G, voies 2 et 3). Par conséquent, l`interaction FBF – GLD-2 est indépendante de l`ARN. Nous avons ensuite demandé si FBF, GLD-2, et GLD-3 s`associent les uns aux autres dans des extraits de C. elegans. Des travaux antérieurs ont montré que le GLD-2 et le GLD-3 sont co-immunopprécipité (Eckmann et al. 2004). Ici, nous montrons que FBF-1 et GLD-2 sont ramenées avec des anticorps α-GLD-3 (figure 6D, voie 6) et que le GLD-2 est ramené avec des anticorps α-FBF-1 (figure 6E, voie 6).

Ainsi, FBF, GLD-2 et GLD-3 peuvent être co-immunopprécipités dans toutes les combinaisons par paires (figure 6J). Nous concluons que les GLD-2, les GLD-3 et les FBF sont susceptibles d`être des composantes d`un complexe dans le germline intact. La conclusion clé de ce travail est que FBF a des rôles doubles et opposés dans la régulation de l`expression GLD-1.

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